miércoles, 24 de junio de 2009

prácticas del tercer parcial

OPERAR EQUIPO Y MATERIAL DE LABORATORIO

PROF: VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ
GRUPO: 2LM
LABORATORIO CLINICO


INDICE
ETAPA PRE ANALÍTICA

1.-Práctica 1 Medio de cultivo
2.-Práctica 2 Técnica de esterilización
ETAPA ANALÍTICA
3.- Práctica 3 Siembras en forma de estrías en medios de cultivo
4.-Práctica 4 Observación macroscópica
5.-Práctica 5 “Frotis”
6.-Práctica 6 Tinción Gram.
7.- Práctica 7 Observación microscópica
ETAPA POST ANALÍTICA
8.-Práctica 8 Aglutinación en suero sanguíneo
9.- Práctica 9 Aglutinación en sangre
INVESTIGACIONES ACERCA DE PRÁCTICAS
1.- Paramecio y enterobacterias
2.- Medio de cultivo y tipos de siembra
3.- Tinción; clasificación y conceptos
4.- Enfermedades:
- salmonelosis
- tifoidea
- paratifoidea
- brucelosis
- proteus
5.- Frotis

PRE-ANALÍTICA

Comprende la consulta del paciente, petición toma de la muestra, transporte de la muestra y la petición.
En esta etapa se efectúa el trato al paciente, utilizando el código de ética.


ELABORACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO Y TÉCNICA DE ESTERILIZACIÓN

Práctica No 1,2


INTRODUCCION:
Esta práctica se realiza con el fin de que el alumno aprenda y practique sobre la preparación de los medios de cultivo, con los diferentes agares, n este caso se utilizo el Salmonella Shigella, y pues este es el primer paso para analizar las muestras del cuerpo. El siguiente paso es el proceso de siembras.


OBJETIVO:
Esta práctica tiene como principal objetivo, que nos adentremos a la preparación y tratamiento de medios de cultivo así como también que nos podamos familiarizar con ellos para observar l crecimiento de bacterias.


MATERIALES:
1. Vaso de pp. 50 ml
2. Vaso de pp. 250 ml
3. Matraz Erlenmeyer de 250 Ml
4. Varilla de cristal como agitador
5. Vidrio de reloj
6. Cajas petri (5-7)
7. Espátula
8. Balanza granataria
9. Cinta masking tape
10. Embudo de cristal
11. Torundas de algodón
12. Papel secante
13. Medio de cultivo en polvo 450 gr.
14. Agua destilada 114 ml


MEDIO DE CULTIVO
BD BIOXON
AGAR
Salmonella y Shigella





1. Esterilización del material
2. Preparación del medio de cultivo
3. Se pesa el vidrio de reloj. (24.5)
4. Vidrio con agar (31.34 gr.)
5. Agar (6.84 gr.)
6. En cada caja petri se utilizaran 19 ml de solución
7. Se utilizaran 6 cajas petri
8. Se multiplica 6 x 19 gr. para realizar regla de 3
9. Se realiza regla de 3
60gr--------1000mL
X gr.-----------114mL
_________________
6.84gr
10. se prepara medio de cultivo
11. se agita con varilla de cristal para deshacer grumos.
12. se deja hervir 57 seg.





13. se deja enfriar





Medio de cultivo listo para esterilizarse en el autoclave

14. al enfriar se tapa con torundas de algodón, selladas con masking tape donde se anotaran los datos debidos.
15. se introduce el medio de cultivo con mucho cuidado a la autoclave por 30 minutos.



½ cultivo tiempo mesa Cajas petri H20 diluido Polvo diluido Tiempo en autoclave
Agar dextrosa saborada --------- M-2 9 171 mL 11.11 gr …
Agar verde brillante --------- M-3 9 171 mL 9.9 gr …
Agar salmonella y shigella --------- M-4 6 114 mL 6.84 gr 20 min en subir a 15 lbs. y 30 min esterilizar
Agar mc conkey --------- M-5 8 160 mL 8 gr …
Agar con eosina y azul de metileno --------- M-6 9 171 mL 6.15 gr …



ESTERILIZACION EN EL AUTOCLAVE
Una ves etiquetadas las cajas se entregan al encargado de la mesa para que introduzca los medios en la autoclave, pero es importante que se sepa muy bien sobre el uso del autoclave ya que su uso inadecuado puede ser peligroso ya que se manejen muy altas temperaturas. Los medios de cultivo duraron 20 min. en la autoclave para subir a 15 lbs. y 30 min. en la esterilización.




Autoclave


BITACORA:
• Equipo de bioseguridad…………………5 min
• Forrado de mesa……………………………2 min
• Obtención del material………………….2min
• Esterilización del material………………3min
• Peso de vidrio de reloj………………….3min
• Regla de tres…………………………………1min
• Vaciado de agua y agar al matraz..2min
• Agitar medio de cultivo………………..3min
• Hervir el medio de cultivo…………….57seg
• Esterilización en el autoclave……….30min
• Vaciado a cajas petri……………………..7min
• Enfriamiento de medio de cultivo…10min


Borrador

PRACTICA No. 1 MEDIOS DE CULTIVO
En esta práctica que se va a realizar se toman en cuenta las tres etapas que se refieren a pre analítica, analítica y post analítica, las cuales se deben de compaginar con la práctica secuencial.
-INSTRUCCIONES:
En el laboratorio de análisis clínicos, debe estar puntual con su equipo de bioseguridad en el laboratorio, solicitar con su vale de material para que se habiliten todos los materiales a utilizar en la práctica de medios de cultivo.
• Una vez estando dentro del laboratorio los integrantes de las mesas a trabajar deberán habilitar el equipo de esterilización “autoclave”, el cual se debe cargar con agua destilada (estudiar técnica de esterilización).
• Vestir mesa de laboratorio con papel blanco.
• Habilitar línea de gas LP, cualquiera de sus integrantes debe abrir la válvula principal para el mantenimiento de la línea, verificarlo que las válvulas principales de cada mesa estén abiertas, las cuales se encuentran por debajo de la misma.
-DESARROLLO:
1. Para realizar un medio de cultivo requerimos los siguientes materiales de cristalería, de apoyo, científicos, etc.
-MATERIALES:
 Matraz erlenmeyer de 250 ml
 Vaso de pp. de 50 ml
 Vaso de pp. de 250 ml
 Varilla de cristal como agitador
 Vidrio de reloj
 Cajas petri (5-7 cajas)
 Espátula
 Balanza granataria
 Cinta masking tape
 Embudo de cristal
 Torundas de algodón
 Papel secante
 Medio de cultivo en polvo, 450 gr
 Agua destilada (?)
-PRACTICA:
 Re hidratamos de acuerdo a las indicaciones que están presentes en la etiqueta del medio de cultivo, la cantidad necesaria de polvo reactivo, para la elaboración de 5- 7 cajas petri, en las que se debe de usar también agua destilada en volumen.
 Para poder re hidratar el polvo reactivo en medio de cultivo necesitamos manejar una regla de 3.
 Pesamos el medio de cultivo en polvo que vayamos a necesitar utilizando el vidrio de reloj.
 Una vez pesado l polvo se mezclara con el agua solicitada para 5 cajas petri.
 Para poder mezclar adecuadamente utilizaremos el matraz erlenmeyer para la mezcla o en su caso dado para el vaso de pp., agitando con la varilla de cristal para que no queden grumos. Una vez terminado este proceso de agitación y mezcla, dejamos reposar el tiempo que nos marque la etiqueta de medio de cultivo.
 En este espacio de tiempo, todo el quipo consensa su nota de desarrollo, la cual lleva gráficos, dibujos, fotos, pequeños videos y así le damos tiempo al proceso de elaboración.
 Una vez reposado se tienen ya listos los mecheros de bunsen, para poder realiza el proceso de ebullición, al cual se le dará un minuto de tiempo desde que este empieza a iniciar, se realiza un pequeño giro en muñequeo, por encima de la flama azul del mechero, siendo muy cuidadosos en que el producto no se derrame del equipo donde se contiene, y q que puede ocasionar quemaduras hasta de segundo grado.
 Se muñequea se observa el hervor, se retira cuidadosamente una y otra vez, tomando el tiempo, hasta que se cumple l minuto.
 Una vez terminada esta acción se observa el hervor, se retira cuidadosamente un y otra ves, tomando el tiempo, hasta que se cumpla el minuto.
 Una vez terminada esta acción se observa, registra y se deposita en la mesa, se deja enfriar.
 Ya estando frio el medio de cultivo liquido, tamponamos con algodón, sellando con cinta masking tape, asegurando bien la boquilla del matraz, etiquetamos con el numero de mesa además la hora y la fecha.
 Los encargados del equipo de esterilización, solicitaran a las mesas los medios de cultivo para ponerlos en el auto clave y esterilizarlos, donde los encargados cerraran el equipo verificando que no exista riesgo se deben utilizar guantes.
 Una ves terminado el proceso de esterilización, se retira el medio de cultivo del autoclave, se deposita en medio de los dos mecheros, los cuales están encendidos, formando un campo de esterilización por radiación.
LLENADO DE CAJAS PETRI:
Deben estar dentro del campo de esterilización de la mesa, no fuera de el, para realizar el llenado con medio de cultivo y este no se contamina.
 Con el vaso de pp de 50 ml realizamos la actividad de vaciado peor antes esterilizaremos la boquilla del vasito en la llave de gas, pasándolo una y otra vez una vez que se realizo la acción vaciaremos la cantidad necesaria para el llenado de la misma.
 Ya baseado el material en la caja petri, se deja cernir tapada, no en su totalidad, para que no exista vapor de agua.
 Ya estando solidificado el medio de cultivo, se tapa, se estiva y se asegura con masking tape, para etiquetar con los datos ya mencionados.
 Si el medio de cultivo se contamina en 24, 48 y 72 horas, se vuelve a realizar la práctica pero sancionados.

PRACTICA 2. TECNICA DE ESTERILIZACION.
Es una herramienta que se ocupa para esterilizar materiales de laboratorio, reactivos o medios de cultivo y algunos otros elementos que se requieran esterilizar. La estructura de la autoclave es la base de material acerado e inoxidable y consta de los sig. Elementos:
1. Tapa de acero inoxidable con válvula de escape en su parte superior de la tapa y un manómetro con forma de reloj. El cual nos da un registro en libras y en grados centígrados y en la parte interna pende una manguerita corrugada que nos da la posibilidad de poder dejar salir el vapor que se encuentra en el interior de la autoclave.
2. La olla en su interior contiene un contenedor de aluminio con dos asas y una pequeña parrilla van a esterilizar en su parte interna tiene como sostén una parrilla de alambre que nos da la facilidad de contener la olla y que no rose con la resistencia que da la energía al equipo en le fondo se encuentra una resistencia que opera por medio de corriente alterna (amperes). La parte exterior de la autoclave se encuentra en un dispositivo de encendido una perilla de baja y alta temperatura y foco de advertencia luminoso color rojo. La parte superior de la autoclave cuenta con unos grilletes que están a base de roscas y que son la medida de seguridad al cerrar la tapa de la autoclave y debe manejarse en forma de cruz. Se va a operar en forma de cruz asegurándolos de tal manera que con ello podemos evitar un accidente. La autoclave se debe manejar en su interior con agua destilada la cual se debe medir para registrar el volumen del líquido utilizado, el que debe ir al ras de la parrilla.
3. El proceso de esterilización de este equipo se lleva en ángulo plano “Tiempo” se ocupa sistema métrico decimal, volumen y masa además sistema anglosajón que es en libras y sistema de temperaturas también vamos a hacer conversiones de grados Celsius, kelvin y Fahrenheit. Este equipo alcanza una presión de 15 libras y una temperatura de 120oC.
4. El proceso de esterilización debe de ser por tiempos, inmediatamente después de entrar al laboratorio se deben de organizar en cada una de sus practicas y preparar el rol de equipo de esterilización por calor húmedo. Iniciando la clase de laboratorio en práctica se debe encender, habilitar con agua destilada el autoclave donde se ocupan 30 min de tiempo hasta que eleve su temperatura a punto de ebullición.
5. Purgar equipo: Una vez que el equipo de autoclave esta cerrado con seguridad se deje elevar la presión y que esta llega hasta 5 libras y posteriormente se empezará a dejar salir presión a base de vapor manipulando con un guante de seguridad para una temperatura la válvula de escape y asegurarse que vuelva a quedar en 0 libras quedando así de esta manera purgado el equipo. Una vez purgado el equipo se deja subir la aguja del manómetro hasta 15 libras y se registra el tiempo de elevación de esta temperatura ya estando las 15 libras se empieza a registrar el tiempo de 30 minutos, tiempo que nos da la esterilización de los productos. La presión de 15 libras que nos da 120oC si se descuida puede ocasionar accidentes severos. EQUIPO DE ESTERILIZACION DE CALOR SECO El equipo es para realizar trabajos inmediatos en cristalería, metales, todo tipo de esterilización pero ordenada para no tener errores en la actividad. Se opera con corriente alterna (amperes), 110 volteos y alcanza temperaturas de hasta 510oC.



ANALÍTICA

Es la fase en la que se realizan las preparaciones y el análisis de la muestra.



SIEMBRA EN CAJAS PETRI CON MEDIOS DE CULTIVO


Práctica No 3

INDICE:

1. Objetivo
2. Introducción
3. Desarrollo
4. Bitácora
5. Conclusión















Objetivo
Esta práctica se trata de siembra con cajas de petri en formas de petri, el objetivo de la práctica es sembrar en las cajas petri las muestras de desechos de cada una de las personas del equipo trajo son: muestras interdentales, raspado de pie, orina, agua fresca, agua de chile, y muestra desangre.
Todo esto es para si en 24-48-72 horas el producto y para observar en cada caja petri la relación que tomo el microscopio.

Material:
Asa bacteriológica
Cajas de petri
Muestras de desecho;(saliva muestra interdental, orina, agua fresca, raspado de pie, muestra desangre)
Vaso precipitado 25 ml
Papel para vestir mesa
Papel secante
Torundas de algodón alcoholizadas
Tape
Centrifuga
2 mecheros
Varilla de cristal
Tubo de ensaye de tapón rojo
Tubo de ensaye
Torniquete
Aguja de 5 ml
Sangre fresca


INTRODUCCION

En esta práctica de siembra de estrías es muy importante porque con ella estamos cultivando las muestras de desecho.
Todo esto es el seguimiento de las demás practicas , con la toma de muestra fue lo mas importante por que se separo el paquete sanguíneo para sembrar el plasma en un medio de cultivo pero con el agar adecuado por que si no esta en el de salmonella scherichia no funcionara por que es el de dispersión.
Los demás medios de desecho se siembra en los demás agares en las determinadas siembras.









DESARROLLO

1-en primer lugar entramos a laboratorio con el equipo de bioseguridad adecuadamente


2-Pedimos el Material que ocupamos en la practica de siembra
3_Se prenden adecuadamente los mecheros de bunsen pero primero se prenden las llaves de gas
4_A continuación se empieza a esterilizar el material de laboratorio para que no se contamine las siembras
5_El profesor entrega las cajas de petri al encargado de la mesa para empezara sembrar

6_Se hace la toma de muestra a la persona que se le estriará la sangre requerida pero antes de todo se tienen que realizar las sig indicaciones:
1-Se limpia el brazo con una torunda de algodón de arriba hacia abajo
2-Se pone el torniquete
3-Se empieza a sentir la veno punción

prácticas del tercer parcial

Técnica de venopunción




Extracción de sangre


4-Se empieza a sacar la toma de sangre


5-Se pasa la sangre al tubo de color rojo

7_Se prende la centrifuga para la orina y de la sangre para la reparación del paquete sanguíneo 1500 rev x min. Por 5 min.

8_Se empieza a preparar las siembras en las cajas de petri


Toma de muestra interdigital



9_Se empiezan a etiquetar cada caja de petri con el nombre del medio de cultivo nombre del paciente grupo.

10_se entregan las cajas de petri al encargado de la mesa para que se los entregue al profesor.

BITACORA

HORA

PROSEDENTE

10;00

Entrada de laboratorio

10;02

Colocarse el equipo de bioseguridad

5 MIN

Esterilización del material

3 MIN

Obtención de muestra sanguínea

2 MIN

coagulación

5 MIN

centrifuga

10 MIN

Muestra interdigital

25 MIN

Sembrar cajas

CONCLUSIÓN

Con esta práctica aprendimos muchas cosas desde que empezamos a ponernos el equipo de bioseguridad hasta la practica de siembra con las cajas petri.

Cada uno del equipo realizo una muestra de las cajas de petri ., con todos nosotros esto es muy importante por que estamos utilizando aparatos nuevos como la centrifuga esto espero y este muy bien .

Jamás hay que decepcionar a las personas que confían en nosotros.

Borrador

MATERIALES:

° Cajas petri con medio de cultivo y elaborado

° Muestras de desecho (saliva, dientes, raspado de pie, orina, agua fresca, muestra de sangre)

° Asa bacteriológica

° Mecheros de bunsen

° Vaso de precipitado con 25 ml de agua destilada

° Papel para vestir mesa

° Papel secante

° Torundas de algodón

° Tape

DESARROLLO:

1- Se realiza la toma de muestra de desecho para sembrarla en forma de estría en la caja petri de la siguiente manera, con el asa bacteriológica tomamos una pequeña muestra de desechos y sembramos.

2- El asa bacteriológica se pasa por el mechero para esterilizarla y hacer el mismo proceso con otra muestra.

3- Una vez ya sembradas se cierran, se etiquetan aplicando los datos de la muestra y el tipo de estría sembrada.

4- Es importante que la siembra de la caja petri y la varilla de cristal al cual se da el nombre de siembras por dispersión.

5- Ya una vez etiquetadas se entregan al encargado



OBSERVACION MACROSCOPICA

Práctica No 4


OBJETIVO

Realizar una observación macroscópica de las colonias bacteriana que hayan creado en 72 hrs. dentro de los medios de cultivo anteriormente elaborados , utilizando el pie de rey o vernier y analizar los cambios que registre las cajas petri así como el color, el olor, crecimiento de las bacterias en los medios de cultivo dentro del campo de esterilización,. Siempre en medio de los dos mecheros de bunsen, en el centro de la mesa que ya esta debidamente vestida.

Introducción

Entramos debidamente organizados a laboratorio de química con nuestro equipo de bioseguridad ya puesto.

Empezaremos con la practica numero 4 que es la de observación macroscópicamente después de una incubación de 37ºc durante 72 hrs. .

Todo esto se debe de observar el crecimiento de las bacterias en las cajas de petri, que a su vez son los siguientes que se utilizaron so:

Eosina y azul de metileno, verde brillante, salmonella schigella, DX saburada, Mc Conkey y EMB., todo esto es para la observación de las bacterias que se pueda dan encontrar.

INDICE

1; OBJETIVO

2; INTRODUCCION

3; MARCO TEORICO

4; DESARROLLO, nota, bitácora dibujos

5; FICHA BIBLIOGRAFICA




MARCO TEORICO

MATERIAL:

2 mecheros de bunsen

Cajas de petri con medio de cultivo ya elaborado

Papel para cubrir la mesa

Pie de rey o vernier




DESARROLLO

llegamos puntualmente al laboratorio con neutro equipo de bioseguridad debidamente colocado, ponemos el papel para cubrir la mesa, solicitamos vale para pedir el material que se ocupara, después colocamos los mecheros y len el centro de la mesa y los prendemos para crear el campo de esterilización y poder colocar los medios de cultivo, una vez en la mesa los medios de cultivo los separamos y los abrimos para poder proceder la observación macroscópica, donde los estudiaremos detenidamente para observar el crecimiento délas colonias bacterianas, registrando el color el olor, las formas su apariencia entre otras cosas después registramos los datos en una tabla.

al terminar volvemos a cerrar las cajas de petri , se las entregamos al profesor junto con los apuntes , quitaremos el papel para cubrir la mesa, los mecheros ,cerramos la llave de gas, subiremos los bancos y nos retiraremos dando por terminado la practica N º 4.









Medios de cultivo agar McConkey

Muestra interdental siembra por agotamiento







Medios de cultivo



BITACORA

ACTIVIDAD

TIEMPO

Colocación del equipo de bioseguridad

3 minutos

Obtención de la materia

1: 30 minutos

observaciones

9 minutos

Tiempo de la practica

52 minutos con 3 segundos

OBSERVACION MACROSCOPICA

HORA DE LA SALIDA: 8; 27AM

SALIDA: 8; 35AM

1/7 DE CULTIVO: eosina y azul de metileno

COLONIAS EN CRECIMIENTO: aparentemente no visibles pero con puntos dispersados

C/1: eosina y azul de metileno, siembra: muestra de orina, método de: kass

OBSERVACIONES: se volvió liquido dado una forma de M voluptuosa y con cambio de color de rojo violeta., dando poco crecimiento bacterias de puntos verdes 0.9 ml olor; orina

HORA DE LA SALIDA: 8:36 AM

SALIDA; 8:40AM

½ DE CULTIVO: Mc Conkey

COLONIAS EN CRECIMIENTO: se encuentran en la siembra y puntos dispersados y florerito dispersados

C/2; Mc Conkey siembra: estría por agotamiento, muestra: interdental.

OBSERVACIONES: crecimiento de colonias, puntos color morados y al final de la siembra los puntos se ven mas grandes y juntos y las colonias mas grandes miden 2cm y 1.8cm olor: fierro

HORA DE ENTRADA: 8:42

SALIDA: 8:47

½ DE CULTIVO: EMB

COLONIAS EN CRECIMIENTO: se observan puntos dispersados en forma de pelusa

C/3: EMB siembra por agotamiento siembra: de frijol

OBSERVACIONES: se observan puntos morados con bastante crecimiento bacteriológico donde una vista como si fuese morado mide 7mm

HORA DE ENTRADA: 8:50

SALIDA: 8:53

½ DE CULTIVO: Mc Conkey

COLONIAS EN CRECIMIENTO: manchas y puntos grises

C/4: Mc Conkey siembra masiva cuadriculada, muestra de: frijol

OBSERVACIONES: aparecieron diversas manchas de diferentes tamaños color: morado grasoso 1mm

HORA DE ENTRADA: 8:53

LADIDA: 8:56

½ CULTIVO: verde brillante

COLONIAS EN CRECIMIENTO: manchas verdosas horizontales

C/5: verde brillante, siembra dispersión muestra de verdura

OBSERVACION: crecimiento de la bacteria en forma horizontal con un color verdoso amarillentos y bacterias de diferente tamaño

HORA DE ENTRADA: 8:56

SALIDA: 8:59

½ DE CULTIVO: DX saborada

COLONIAS EN CRECIMINETO: puntos blancos

C/6: DX por agotamiento muestra: interdigital

OBSERVACIONES: muchos puntos blancos alrededor y en el centro un color oscuro y de diferentes tamaños, olor: a queso Cotija

HORA DE ENTRADA: 9:00

SALIDA: 9:01

½ DE CULTIVO: salmonella shigella

COLONIAS EN CRECIMIENTO: ninguna

C/7: siembra cuadriculada muestra: plasma

OBSERVACIONES: no se registro nada, solo cambio el color a durazno

HORA DE ENTRADA: 9:01

SALIDA: 9:03

½ DE CULTIVO: eusina y azul de metileno

COLONIAS EN CRECIMIENTO: contaminado

OBSERVACIONES: fue contaminada y registra un olor extremadamente fuete mide 6mm

COMPETENCIAS

Destreza manual y de observación, se utilizoolfato, vista y los distintos sentidos, excepto el gusto.

Se utilizo suma resta y división y la utilización de pie de rey.

No se realizo observación de 24 hrs. porque se atravesó el fin de semana

CONCLUSIÓN

La observación fue satisfactoria, no en todas las siembras en medios de cultivos presenta el crecimiento de bacterias, el profesor nos explico que se debe a dos causas

a) el medio esta mal elaborado

b) la persona ala que se le realizo la toma de muestra esta sana

Esperemos que la segunda opción sea, en las demás cajas petri si hubo crecimiento de las bacterias en la que mas se notaba era en la muestra de frijol .

Fue una práctica fácil para los que estudiaron.

Ficha bibliográfica

1; observaciones personales

2: apuntes de clase

Borrador

OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA

El alumno realizara observaciones macroscópicamente de las cajas de petri. Anteriormente sembradas en las que se presento el desarrollo o crecimiento de las colonias bacterianas.

Material:

1: cajas de petri con medio de cultivo

2; asa bacteriológica

3: dos mecheros de bunsen

4: vaso de precipitado de 25 ml

5: pie de rey o vernier

6: 3 torundas de algodón secas

7: 3 torundas de algodón alcoholizadas

DESARROLLO (macroscópicamente)

1. las cajas de petri ya sembradas son depositadas en le campo esterilizado, que se realiza con los dos mecheros de bunsen en la parte media de la mesa.

2. una vez teniendo el campo de esterilización se observa los crecimientos de las cajas de petri se registra lo observado, se abre la caja de petri se registra el olor que le sale, el color que presenta y se registra en gráficos y fotografías



FROTIS


Práctica No 5

Nombre:


Objetivo

Realizar un frotis de las colonias bacterianas que han crecido en los medios de cultivo, el cual deberá ser fino y delgado para poder realizar un proceso de tinción y posteriormente observarlo microscópicamente con aceite de inmersión en objetivo 100x.

Introducción

Solicitaremos los materiales necesarios para realizar la práctica, con nuestro equipo de bioseguridad ya colocado. Pediremos principalmente las cajas Petri con los medios de cultivo, tendremos el debido cuidado al utilizar los materiales y los colocaremos dentro de la zona de esterilización en medio de la mesa, y comenzaremos la práctica No 5 llamada “FROTIS”.

Índice

1.-Objetivo

2.-Introducción

3.- Marco Teórico

*Desarrollo

*Notas

*Dibujos

* Bitácora

*Observaciones personales

4.- Conclusión

5.- Fichas Bibliográficas

Marco Teórico

Materiales:

1.-Cajas Petri con medios de cultivo

2.-Asa Bacteriológica

3.-Vaso de precipitados con agua destilada con 25 ml

4.- 2 Mecheros de Bunsen

5.-Papel secante

6.- 8 portaobjetos

Desarrollo

Tomaremos las cajas Petri con los medios de cultivo y las abriremos, esterilizaremos las asas bacteriológicas con los mecheros de bunsen, tomaremos una gota de agua destilada con el asa bacteriológica y la colocaremos en el centro del portaobjetos, después toaremos una pequeña muestra de la bacteria que ha crecido en el medio de cultivo y la esparciremos con movimientos de izquierda a derecha, si el frotis queda muy grueso esterilizamos de nuevo el asa bacteriológica y le colocamos de nuevo una gota de agua destilada realizando el mismo procedimiento hasta que el frotis quede finamente delgado, que casi nos se vea más que a tras luz.

Una vez que el frotis ya quedo delgado vamos a fijarlo al portaobjetos es decir lo pasaremos por la flama del mechero sin dejarlo fijamente para evitar que las bacterias se derritan y cambien su morfología. Una vez fijado el frotis queda listo para el proceso de tinción Gram.

Tiempo

Actividad

3 min.

Colocar equipo de bioseguridad

5 min.

Esterilizar las asas bacteriológicas

20 min

Realizar frotis

3 min

Fijar frotis

Observaciones

Fue un poco más difícil de lo que pensamos, pero aún así lo hicimos bien quedo el frotis delgado y fijado. Listo para la tinción Gram.

Conclusión

Fue la práctica que realizamos en menos tiempo y si nos fue suficiente, ya que terminamos justo a tiempo, si batallamos un poquito en adelgazar el frotis, pero todo resulto bien casi no se veía> A tras luz sí. Una vez listo el frotis y ya fijado los guardamos, los colocamos en papel secante y lo pegamos con tape, se las entregamos al profesor, al igual que los medios de cultivo, que se utilizaron en caso de necesitar hacer un nuevo frotis.

Ficha Bibliográfica

1.- Observaciones personales y grupales

2.- Apuntes de clase

3.- www.monografias.com

Borrador

Práctica No 5

Frotis

“Elaboración de un frotis

El alumno debe realizar un frotis con el producto teñido en las cajas Petri, el cual debe ser fino y delgado para poder realizar un proceso de tinción.

Materiales:

1.- Cajas Petri con medios de cultivo

2.- asa bacteriológica

3.-vaso de precipitados con 25 ml de agua destilada

4.- Mecheros de bunsen

5.-Papel secante

6.- 8 portaobjetos

Desarrollo

Se toma un portaobjetos limpio para poder realizar en su superficie un frotis fresco con el material de la caja Petri “bacteriológico”.

Con el asa bacteriológica se va a realizar un barrido en el portaobjetos en su parte central, esterilizando primero el asa bacteriológica en la flama del mechero, dejándola hasta rojo vivo, una vez fijado el frotis queda listo para el proceso de tinción de Gram.


TINCION DE GRAM


Práctica No 6



Se debe realizar una tinción en el frotis para poder llegar ala observación microscópica de los organismos denominados bacterias los que observamos en forma de esferas, bastones y espirales cave mencionar en este elementó de observación no podríamos llegar a señalar microscópicamente las espirales

Materiales

Caja de COPRI mecheros

Porta objetos aceite

Torundas de algodón alcoholizadas microscopio

Papel secante

Desarrollo

Una vez teñida la laminilla con frotis se le aplica una gota de aceite de inmersión para poder observaren objetivo de 100x en este proceso de observación microscópica tenemos la facilidad de poder observar formas esféricas lo que nos deja observar las coloraciones de la tinción de gramos la presentación en esferas, que estamos observando bacterias denominadas cocos, donde veremos investigar sus características coloniales de importancia medica cuando observamos bastoncitos de bacilos. Donde encontraremos una gran cantidad investigaremos sus características coloniales y nombres de interés medico.



Tinción Gram










Objetivo

El objetivote esta práctica fue aprender hacer la tinción de Gram. , y aprender a enfocar mejor en el microscopio. Ya que ya sabíamos enfocar pero esta práctica nos sirvió para que pudiéramos enfocar mejor. Otro de los objetivos es observar bien cada imagen que se vio en el microscopio.

Introducción

Esta práctica fue la elaboración de tinción de Gram., pasamos por cuatro botes con soluciones distintas el porta objetos en cada bote era un minuto y en cada cambio se tenia que lavar con agua corriente ya listo se tenia que esperar a k se secara para después enfocar.

Enfoque microscopico

Materiales

*microscopio

*6 cajas de petri

*porta objetos

*papel secante

*3 torundas de algodón secas

*aceite de inmersión

*2 mecheros

*papel para vestir mesa

*caja de COPRI

Desarrollo

Primero tomamos el cubre objetos para realizar los pasos que estaban en el pizarrón.

Después fuimos pasando por el porta objetos por 1 min. En cada solución y después de cada cambio de aceite se lavaba el cubre objetos con agua corriente después de todos los pasos se espero para que el cubre objetos se secara para después ponerle una gotita de aceite en el centro y hay poder ver en el microscopio las bacterias muy raras largas y otras cortas.


Conclusión

Mi conclusión fue que es que cada que pasemos el cubre objetos por cada respirante tenemos que enjuagarlo con agua y en esta practica sirvió de mucho.





PRUEBA DE AGLUTINACIÓN


práctica No 8





*ÍNDICE

1.- Objetivo

2.- Introducción

3.- Materiales

4.- Marco teórico

5.- Bitácora

6.- Conclusión

*Objetivo

Esta práctica tiene como objetivo que el alumno de laboratorio de análisis clínicos aprenda a realizar una prueba de aglutinación en suero sanguíneo, utilizando los instrumentos de laboratorio, equipo científico y reactivo para alcanzar su objetivo en la elaboración de un examen clínico denominado reacciones febriles, dando la oportunidad de investigar microorganismos bacteriológicos.

*Introducción

En esta practica se llevara a cabo la técnica de venopuncion para la extracción de la sangre fresca, donde se obtendrá por medio de centrifuga la separación de paquete sanguíneo y suero plasmático.

En esta práctica se debe de aplicar el tema de serológica, ya que ocuparemos los tificos H, O, y paratíficos A, B, Brucella Abortus y Proteus OX19.

Esta prueba es exclusivamente de aglutinación por lo que se debe observar a tras luz en forma macroscópica y en el microscopio, en el objetivo 10x de forma microscópica.

*Materiales

1.- Lamina de cristal para reacciones febriles.

2.- Tubo de ensaye tapón rojo

3.- Palitos de madera

4.- Torundas de algodón secas

5.- Torundas alcoholizadas

6.- Centrifuga

7.- Microscopio

8.- Reactivos febriclin

9.- Jeringa hipodérmica desechable

10.- Torniquete

11.- Masking tape

12.- Pipeta Pasteur

13.- Bulbo

*Marco Teórico

1.-La apertura de la práctica fue con la obtención de la toma de muestra, la cual costo un poco de trabajo puesto que es la primera vez que de obtiene sangre fresca obtenida por nosotros mismos.


2.-Ya obtenida la sangre fresca de los dos pacientes es introducida a los tubos de ensaye correspondientes, los cuales son etiquetados con los datos del paciente.

3.-La sangre se deja coagular y es introducida a la centrifuga para que a través de ella se obtenga la separación de paquete sanguíneo y suero plasmático.


4.- Ya separados el suero plasmático del paquete sanguíneo, el suero plasmático se pipetea a través de la pipeta Pasteur con bulbo y es punteado en la laminilla de cristal trasparente, así igual con el otro suero obtenido de la segunda toma de muestra.











5.- Ya punteada la laminilla de cristal, se le agrega una gota de febriclin tifico H, O y paratifico A, B, Brucella Abourtus y Proteus 0X19 de la siguiente manera.





6.- Ya realizado este procedimiento, con palillos de madera se mezcla el suero plasmático con los reactivos, claro esta, sin ser reutilizados los palillos.

7.- De igual manera se realiza una maniobra agitando la laminilla de cristal de un lado a otro y se observa macroscópicamente a tras luz.

8.- El resultado a tras luz fue homogéneo pero para tener un resultado mas seguro se realiza la observación microscópica

9.- La laminilla de cristal se coloca en la platina del microscopio y es observada en el objetivo 10x








10.- El resultado de esta prueba fue negativo, puesto que no se registro macroscópicamente y microscópicamente nada fuera de lo normal.

11.- La observación microscópica de igual modo que la macroscópica fue homogénea.

Mesa Tifico Paratifico Brucella Proteus Observaciones

Abourtus 0X19

M-1

M-2

M-3

M-4

M-5

M-6


. .

Se observo que todas las pruebas realizadas fueron negativas puesto que no aparecieron punteadas a excepción de dos muestras que si aparecieron poco punteadas.

*Bitácora

-Equipo de bioseguridad: 3min

-Indicaciones: 11min

-Toma de muestra: 45min.

*Conclusión

Esta practica fue la mas importante para mi, puesto que aquí aparte de aprender a realizar el objetivo de la práctica que como ya sabemos, es aprender a realizar pruebas de aglutinación en suero sanguíneo, también dimos otro paso en la obtención de toma de muestra, ya que como lo mencione, nosotros mismos obtuvimos las muestras de sangre fresca, no fue nada fácil, pero con ayuda de los conocimientos adquiridos y brindados por los profesores de la especialidad fue del todo favorable.

También pusimos en practica muchos de nuestros otros conocimientos así como en las competencias en que participamos.

Borrador

Practica N° 8 “Prueba de aglutinación en suero de sangre”

- Examen de laboratorio “Reacciones febriles”

El alumno de laboratorio de análisis clínicos aprenderá a realizar una prueba de aglutinación en suero sanguíneo y sangre fresca, utilizando los instrumentos de laboratorio, equipo científico y reactivos para alcanzar su objetivo en la elaboración de un examen clínico denominado reacciones febriles; dando una oportunidad de poder investigar microorganismos bacteriológicos pertenecientes al grupo de las enterobacterias, donde encontraremos salmonella, brucilla y proteus.

*Materiales:

1.- Lamina de cristal para recciones febriles.

2.- Tubo de ensaye tapón rojo

3.- Palito de madera

4.- Torundas de algodón secas.

5.- Centrifuga

6.- Microscopio

7.- Reactivo febriclin

8.- Jeringa hipodérmica desechable

9.- Torniquete

10.- Torundas de algodón alcoholizadas

11.- Masking tape

12.- Pipeta Pasteur

13.- Bulbo

Nota: Utilizar técnica de veno punción para la extracción de sangre fresca, donde se obtendrá por medio de centrifuga la separación de paquete sanguíneo y suero plasmático.

En esta prueba se debe de aplicar el tema de serológica, ya que ocuparemos los tíficos H y O, paratíficos AB, brucilla abourtus y proteus 0X19

Esta prueba es exclusivamente de aglutinación. Por lo que se debe de observar a tras luz en forma macroscópica y en el microscopio, en el objetivo 10x de forma microscópica.

*Desarrollo

1.- Se utiliza la técnica de veno punción para la extracción de la sangre fresca de 2.5ml

2.- Una vez obtenida la sangre se deposita en el tubo con tapón rojo, pero antes, en el inicio de la extracción y vaciamiento del tubo se toma el tiempo de coagulación, el cual es de 1-2 min. Hasta 5 min. Y en algunas ocasiones hasta de 8min.

3.- Ya coagulada la sangre se retira el tapón del tubo y se depositan todos los tubos en la centrifuga para centrifugar a 1500 revoluciones por minuto, esto nos dará como resultado separación de paquetes.

4.- Una vez que se tengan los paquetes de sangre y plasma se requiere un tubo de sangre vacío para trasvasar el plasma exclusivamente, con el que se va a trabajar el punteo en lámina de cristal utilizando la pipeta Pasteur para puntear.

5.- Ya obtenido el punteo del plasma en la lamina de cristal se le agrega una gota de reactivo febriclin tendiendo el cuidado necesario del orden de los cerotitos “O-H-A-B-BRUCELLA Y PROTEUS”

6.- Ya obtenido este proceso en orden de serotipos prensamos pequeños pedazos de palillos de madera y mezclamos de forma individual cada uno de ellos, no se debe utilizar el mismo palillo antes utilizado.

7.- Ya estando mezclada la solución plasmática y reactivo de febriclin realizamos pequeños movimientos de rotación y traslación.

8.- Ya terminada esa mezcla observamos de forma macroscópica a tras luz, y si observamos la imagen punteada quiere decir que es una prueba positiva, si no es así, de le da el termino de homogéneo y será negativo.

9.- En la prueba que observamos el punteo, tanto macroscópicamente como microscópicamente, nos indica que tenemos una prueba de aglutinación en plasma y que debemos reportar de la siguiente manera.

O……negativo/positivo

H……negativo/positivo

A……negativo positivo

B……negativo/positivo

Brucella….negativo/positivo

Proteus…...negativo/positivo

Positivo para todas aquellas que se observe aglutinación y negativo para aquellas en las que no existe aglutinación

10.- En este examen de laboratorio, se lleva a cabo las 3 etapas: pre analítica, analítica y post analítica

POST-ANALÍTICA


Esta fase contempla los tiempos de respuesta, aplicación de protocolos para la realización de pruebas secuenciales.



AGLUTINACIÓN EN SANGRE



Objetivo

El objetivo de esta práctica es realizar la prueba de aglutinación en sangre fresca para realizar el análisis de tipos sanguíneos, haciendo una observación macroscópica de la aglutinación.

Introducción

Vamos a hacer una prueba aglutinación en sangre fresca, utilizando el tubo con tapón morado que contiene anticoagulante, tipificadores anti- A, anti- B y anti-D color amarillo, azul y transparente respectivamente, punteando la sangre sobre la placa excavada.

Índice

1. Objetivo

2. Introducción

3. Marco teórico

*Desarrollo

*Bitácora

*Cuadro

4.- Conclusión

Marco Teórico

Materiales:

Placa excavada de porcelana

Palillos de madera

Tubo de ensaye de tapón morado con anticoagulante

Torniquete

Jeringa hipodérmica desechable de 5 ml

Torundas de algodón alcoholizadas

Torundas de algodón secas

Papel para cubrir mesa

Gradilla

Reactivos tipificadores anti-A, anti-B y anti-D

Desarrollo

Se tomara la muestra de sangre y se colocara en el tubo de ensaye con tapón morado y anticoagulante.

Se puntea en la placa excavada con la pipeta Pasteur y se le colocaran los tipificadores anti-A, anti-B y anti-D





Tipificadores



Se mezclara la sangre con el tipificador, utilizando los palillos de madera, después se harán movimientos en rotación y traslación para observar la aglutinación y darnos cuenta si la sangre es tipo positivo o negativo








Una vez terminado deberemos limpiar las pipetas para que la sangre no se pegue, ya que si lo hace deberemos tirarla. Nos desharemos de los materiales de acuerdo a la Nom-087.

Bitácora

Actividad

Tiempo

Toma de muestra

10 min

Punteo y mezcla de sangre con tipificadores

5 min.

Observación macroscópica

5 min.

Conclusión

Sí logramos observar la aglutinación que se producía al mezclar la sangre con los tipificadores anti-A, anti-B y anti-D, en ambos pacientes hubo una aglutinación notoria en el tipificador anti-A y lo observado es el resultado de que ambos pacientes tienen un RH positivo.

Hora de

Hora de

Materiales


Anti- A

Anti-B

Anti-D

Observación

Competencia

entrada

salida








8:00 A.M

10:00

Tubo de

Apertura:




Con el

Se utilizó la



con tapón

comienzo




tipificador

destreza y



morado,

con la




anti-A la

habilidad



placa de

toma de




sangre quedo

manual,



porcelana

muestra




más aglutinada

mental , así



excavada,

y la colo-




que con los

como la de



centrifuga,

cación de




anti-B y anti-

captación.



pipeta Pateur

sangre en




D, lo que




y bulbo,

el tubo




significa que




palillos de

con tapón




los pacientes




madera,

morado




son RH




torundas de

con




positiva. Si no se




algodón

anticoagu-




hubiera cortado




alcoholizadas

lante




la sangre




papel secan-

Desarrollo:




hubiese sido




te y para la

Puntear




tipo negativo




mesa de lab.,

la sangre








gradillas,

en la placa








reactivos

excavada








tipificadores

con la








anti-A,

pipeta








anti-B

Pasteur,








anti-D

agregarle









tipificado-









res y









mezclarlos









con los









palillos de









madera









Cierre:









Observar









aglutina-









ción









macros-









copicamnte









y descubrir









el tipo









sanguíneo