prácticas del tercer parcial

OPERAR EQUIPO Y MATERIAL DE LABORATORIO

PROF: VICTOR MANUEL ALFARO LOPEZ
GRUPO: 2LM
LABORATORIO CLINICO


INDICE
ETAPA PRE ANALÍTICA

1.-Práctica 1 Medio de cultivo
2.-Práctica 2 Técnica de esterilización
ETAPA ANALÍTICA
3.- Práctica 3 Siembras en forma de estrías en medios de cultivo
4.-Práctica 4 Observación macroscópica
5.-Práctica 5 “Frotis”
6.-Práctica 6 Tinción Gram.
7.- Práctica 7 Observación microscópica
ETAPA POST ANALÍTICA
8.-Práctica 8 Aglutinación en suero sanguíneo
9.- Práctica 9 Aglutinación en sangre
INVESTIGACIONES ACERCA DE PRÁCTICAS
1.- Paramecio y enterobacterias
2.- Medio de cultivo y tipos de siembra
3.- Tinción; clasificación y conceptos
4.- Enfermedades:
- salmonelosis
- tifoidea
- paratifoidea
- brucelosis
- proteus
5.- Frotis

PRE-ANALÍTICA

Comprende la consulta del paciente, petición toma de la muestra, transporte de la muestra y la petición.
En esta etapa se efectúa el trato al paciente, utilizando el código de ética.


ELABORACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO Y TÉCNICA DE ESTERILIZACIÓN

Práctica No 1,2


INTRODUCCION:
Esta práctica se realiza con el fin de que el alumno aprenda y practique sobre la preparación de los medios de cultivo, con los diferentes agares, n este caso se utilizo el Salmonella Shigella, y pues este es el primer paso para analizar las muestras del cuerpo. El siguiente paso es el proceso de siembras.


OBJETIVO:
Esta práctica tiene como principal objetivo, que nos adentremos a la preparación y tratamiento de medios de cultivo así como también que nos podamos familiarizar con ellos para observar l crecimiento de bacterias.


MATERIALES:
1. Vaso de pp. 50 ml
2. Vaso de pp. 250 ml
3. Matraz Erlenmeyer de 250 Ml
4. Varilla de cristal como agitador
5. Vidrio de reloj
6. Cajas petri (5-7)
7. Espátula
8. Balanza granataria
9. Cinta masking tape
10. Embudo de cristal
11. Torundas de algodón
12. Papel secante
13. Medio de cultivo en polvo 450 gr.
14. Agua destilada 114 ml


MEDIO DE CULTIVO
BD BIOXON
AGAR
Salmonella y Shigella





1. Esterilización del material
2. Preparación del medio de cultivo
3. Se pesa el vidrio de reloj. (24.5)
4. Vidrio con agar (31.34 gr.)
5. Agar (6.84 gr.)
6. En cada caja petri se utilizaran 19 ml de solución
7. Se utilizaran 6 cajas petri
8. Se multiplica 6 x 19 gr. para realizar regla de 3
9. Se realiza regla de 3
60gr--------1000mL
X gr.-----------114mL
_________________
6.84gr
10. se prepara medio de cultivo
11. se agita con varilla de cristal para deshacer grumos.
12. se deja hervir 57 seg.





13. se deja enfriar





Medio de cultivo listo para esterilizarse en el autoclave

14. al enfriar se tapa con torundas de algodón, selladas con masking tape donde se anotaran los datos debidos.
15. se introduce el medio de cultivo con mucho cuidado a la autoclave por 30 minutos.



½ cultivo tiempo mesa Cajas petri H20 diluido Polvo diluido Tiempo en autoclave
Agar dextrosa saborada --------- M-2 9 171 mL 11.11 gr …
Agar verde brillante --------- M-3 9 171 mL 9.9 gr …
Agar salmonella y shigella --------- M-4 6 114 mL 6.84 gr 20 min en subir a 15 lbs. y 30 min esterilizar
Agar mc conkey --------- M-5 8 160 mL 8 gr …
Agar con eosina y azul de metileno --------- M-6 9 171 mL 6.15 gr …



ESTERILIZACION EN EL AUTOCLAVE
Una ves etiquetadas las cajas se entregan al encargado de la mesa para que introduzca los medios en la autoclave, pero es importante que se sepa muy bien sobre el uso del autoclave ya que su uso inadecuado puede ser peligroso ya que se manejen muy altas temperaturas. Los medios de cultivo duraron 20 min. en la autoclave para subir a 15 lbs. y 30 min. en la esterilización.




Autoclave


BITACORA:
• Equipo de bioseguridad…………………5 min
• Forrado de mesa……………………………2 min
• Obtención del material………………….2min
• Esterilización del material………………3min
• Peso de vidrio de reloj………………….3min
• Regla de tres…………………………………1min
• Vaciado de agua y agar al matraz..2min
• Agitar medio de cultivo………………..3min
• Hervir el medio de cultivo…………….57seg
• Esterilización en el autoclave……….30min
• Vaciado a cajas petri……………………..7min
• Enfriamiento de medio de cultivo…10min


Borrador

PRACTICA No. 1 MEDIOS DE CULTIVO
En esta práctica que se va a realizar se toman en cuenta las tres etapas que se refieren a pre analítica, analítica y post analítica, las cuales se deben de compaginar con la práctica secuencial.
-INSTRUCCIONES:
En el laboratorio de análisis clínicos, debe estar puntual con su equipo de bioseguridad en el laboratorio, solicitar con su vale de material para que se habiliten todos los materiales a utilizar en la práctica de medios de cultivo.
• Una vez estando dentro del laboratorio los integrantes de las mesas a trabajar deberán habilitar el equipo de esterilización “autoclave”, el cual se debe cargar con agua destilada (estudiar técnica de esterilización).
• Vestir mesa de laboratorio con papel blanco.
• Habilitar línea de gas LP, cualquiera de sus integrantes debe abrir la válvula principal para el mantenimiento de la línea, verificarlo que las válvulas principales de cada mesa estén abiertas, las cuales se encuentran por debajo de la misma.
-DESARROLLO:
1. Para realizar un medio de cultivo requerimos los siguientes materiales de cristalería, de apoyo, científicos, etc.
-MATERIALES:
 Matraz erlenmeyer de 250 ml
 Vaso de pp. de 50 ml
 Vaso de pp. de 250 ml
 Varilla de cristal como agitador
 Vidrio de reloj
 Cajas petri (5-7 cajas)
 Espátula
 Balanza granataria
 Cinta masking tape
 Embudo de cristal
 Torundas de algodón
 Papel secante
 Medio de cultivo en polvo, 450 gr
 Agua destilada (?)
-PRACTICA:
 Re hidratamos de acuerdo a las indicaciones que están presentes en la etiqueta del medio de cultivo, la cantidad necesaria de polvo reactivo, para la elaboración de 5- 7 cajas petri, en las que se debe de usar también agua destilada en volumen.
 Para poder re hidratar el polvo reactivo en medio de cultivo necesitamos manejar una regla de 3.
 Pesamos el medio de cultivo en polvo que vayamos a necesitar utilizando el vidrio de reloj.
 Una vez pesado l polvo se mezclara con el agua solicitada para 5 cajas petri.
 Para poder mezclar adecuadamente utilizaremos el matraz erlenmeyer para la mezcla o en su caso dado para el vaso de pp., agitando con la varilla de cristal para que no queden grumos. Una vez terminado este proceso de agitación y mezcla, dejamos reposar el tiempo que nos marque la etiqueta de medio de cultivo.
 En este espacio de tiempo, todo el quipo consensa su nota de desarrollo, la cual lleva gráficos, dibujos, fotos, pequeños videos y así le damos tiempo al proceso de elaboración.
 Una vez reposado se tienen ya listos los mecheros de bunsen, para poder realiza el proceso de ebullición, al cual se le dará un minuto de tiempo desde que este empieza a iniciar, se realiza un pequeño giro en muñequeo, por encima de la flama azul del mechero, siendo muy cuidadosos en que el producto no se derrame del equipo donde se contiene, y q que puede ocasionar quemaduras hasta de segundo grado.
 Se muñequea se observa el hervor, se retira cuidadosamente una y otra vez, tomando el tiempo, hasta que se cumple l minuto.
 Una vez terminada esta acción se observa el hervor, se retira cuidadosamente un y otra ves, tomando el tiempo, hasta que se cumpla el minuto.
 Una vez terminada esta acción se observa, registra y se deposita en la mesa, se deja enfriar.
 Ya estando frio el medio de cultivo liquido, tamponamos con algodón, sellando con cinta masking tape, asegurando bien la boquilla del matraz, etiquetamos con el numero de mesa además la hora y la fecha.
 Los encargados del equipo de esterilización, solicitaran a las mesas los medios de cultivo para ponerlos en el auto clave y esterilizarlos, donde los encargados cerraran el equipo verificando que no exista riesgo se deben utilizar guantes.
 Una ves terminado el proceso de esterilización, se retira el medio de cultivo del autoclave, se deposita en medio de los dos mecheros, los cuales están encendidos, formando un campo de esterilización por radiación.
LLENADO DE CAJAS PETRI:
Deben estar dentro del campo de esterilización de la mesa, no fuera de el, para realizar el llenado con medio de cultivo y este no se contamina.
 Con el vaso de pp de 50 ml realizamos la actividad de vaciado peor antes esterilizaremos la boquilla del vasito en la llave de gas, pasándolo una y otra vez una vez que se realizo la acción vaciaremos la cantidad necesaria para el llenado de la misma.
 Ya baseado el material en la caja petri, se deja cernir tapada, no en su totalidad, para que no exista vapor de agua.
 Ya estando solidificado el medio de cultivo, se tapa, se estiva y se asegura con masking tape, para etiquetar con los datos ya mencionados.
 Si el medio de cultivo se contamina en 24, 48 y 72 horas, se vuelve a realizar la práctica pero sancionados.

PRACTICA 2. TECNICA DE ESTERILIZACION.
Es una herramienta que se ocupa para esterilizar materiales de laboratorio, reactivos o medios de cultivo y algunos otros elementos que se requieran esterilizar. La estructura de la autoclave es la base de material acerado e inoxidable y consta de los sig. Elementos:
1. Tapa de acero inoxidable con válvula de escape en su parte superior de la tapa y un manómetro con forma de reloj. El cual nos da un registro en libras y en grados centígrados y en la parte interna pende una manguerita corrugada que nos da la posibilidad de poder dejar salir el vapor que se encuentra en el interior de la autoclave.
2. La olla en su interior contiene un contenedor de aluminio con dos asas y una pequeña parrilla van a esterilizar en su parte interna tiene como sostén una parrilla de alambre que nos da la facilidad de contener la olla y que no rose con la resistencia que da la energía al equipo en le fondo se encuentra una resistencia que opera por medio de corriente alterna (amperes). La parte exterior de la autoclave se encuentra en un dispositivo de encendido una perilla de baja y alta temperatura y foco de advertencia luminoso color rojo. La parte superior de la autoclave cuenta con unos grilletes que están a base de roscas y que son la medida de seguridad al cerrar la tapa de la autoclave y debe manejarse en forma de cruz. Se va a operar en forma de cruz asegurándolos de tal manera que con ello podemos evitar un accidente. La autoclave se debe manejar en su interior con agua destilada la cual se debe medir para registrar el volumen del líquido utilizado, el que debe ir al ras de la parrilla.
3. El proceso de esterilización de este equipo se lleva en ángulo plano “Tiempo” se ocupa sistema métrico decimal, volumen y masa además sistema anglosajón que es en libras y sistema de temperaturas también vamos a hacer conversiones de grados Celsius, kelvin y Fahrenheit. Este equipo alcanza una presión de 15 libras y una temperatura de 120oC.
4. El proceso de esterilización debe de ser por tiempos, inmediatamente después de entrar al laboratorio se deben de organizar en cada una de sus practicas y preparar el rol de equipo de esterilización por calor húmedo. Iniciando la clase de laboratorio en práctica se debe encender, habilitar con agua destilada el autoclave donde se ocupan 30 min de tiempo hasta que eleve su temperatura a punto de ebullición.
5. Purgar equipo: Una vez que el equipo de autoclave esta cerrado con seguridad se deje elevar la presión y que esta llega hasta 5 libras y posteriormente se empezará a dejar salir presión a base de vapor manipulando con un guante de seguridad para una temperatura la válvula de escape y asegurarse que vuelva a quedar en 0 libras quedando así de esta manera purgado el equipo. Una vez purgado el equipo se deja subir la aguja del manómetro hasta 15 libras y se registra el tiempo de elevación de esta temperatura ya estando las 15 libras se empieza a registrar el tiempo de 30 minutos, tiempo que nos da la esterilización de los productos. La presión de 15 libras que nos da 120oC si se descuida puede ocasionar accidentes severos. EQUIPO DE ESTERILIZACION DE CALOR SECO El equipo es para realizar trabajos inmediatos en cristalería, metales, todo tipo de esterilización pero ordenada para no tener errores en la actividad. Se opera con corriente alterna (amperes), 110 volteos y alcanza temperaturas de hasta 510oC.



ANALÍTICA

Es la fase en la que se realizan las preparaciones y el análisis de la muestra.



SIEMBRA EN CAJAS PETRI CON MEDIOS DE CULTIVO


Práctica No 3

INDICE:

1. Objetivo
2. Introducción
3. Desarrollo
4. Bitácora
5. Conclusión















Objetivo
Esta práctica se trata de siembra con cajas de petri en formas de petri, el objetivo de la práctica es sembrar en las cajas petri las muestras de desechos de cada una de las personas del equipo trajo son: muestras interdentales, raspado de pie, orina, agua fresca, agua de chile, y muestra desangre.
Todo esto es para si en 24-48-72 horas el producto y para observar en cada caja petri la relación que tomo el microscopio.

Material:
Asa bacteriológica
Cajas de petri
Muestras de desecho;(saliva muestra interdental, orina, agua fresca, raspado de pie, muestra desangre)
Vaso precipitado 25 ml
Papel para vestir mesa
Papel secante
Torundas de algodón alcoholizadas
Tape
Centrifuga
2 mecheros
Varilla de cristal
Tubo de ensaye de tapón rojo
Tubo de ensaye
Torniquete
Aguja de 5 ml
Sangre fresca


INTRODUCCION

En esta práctica de siembra de estrías es muy importante porque con ella estamos cultivando las muestras de desecho.
Todo esto es el seguimiento de las demás practicas , con la toma de muestra fue lo mas importante por que se separo el paquete sanguíneo para sembrar el plasma en un medio de cultivo pero con el agar adecuado por que si no esta en el de salmonella scherichia no funcionara por que es el de dispersión.
Los demás medios de desecho se siembra en los demás agares en las determinadas siembras.









DESARROLLO

1-en primer lugar entramos a laboratorio con el equipo de bioseguridad adecuadamente


2-Pedimos el Material que ocupamos en la practica de siembra
3_Se prenden adecuadamente los mecheros de bunsen pero primero se prenden las llaves de gas
4_A continuación se empieza a esterilizar el material de laboratorio para que no se contamine las siembras
5_El profesor entrega las cajas de petri al encargado de la mesa para empezara sembrar

6_Se hace la toma de muestra a la persona que se le estriará la sangre requerida pero antes de todo se tienen que realizar las sig indicaciones:
1-Se limpia el brazo con una torunda de algodón de arriba hacia abajo
2-Se pone el torniquete
3-Se empieza a sentir la veno punción